Физико-химическая характеристика терпеноидов и методы их анализа
Для выделения ЭМ из растительного материала широко используются перегонка с водяным паром. Здесь используется стеклянные приборы различной конструкции, позволяющие с точностью ± 0,02 мл измерить объем выделенного ЭМ. Анализ на этой стадии заканчивается и на основании величины содержания ЭМ решается вопрос о качестве лекарственного растительного сырья. В процессе перегонки ЭМ собирается в 100 мл пентана или гексана и полученная смесь исследуется с помощью ГЖХ [65].
Разработан комбинированный метода выделения ЭМ с помощью сочетания перегонки с водяным паром и экстракция терпеновых соединений из дистиллята органическими растворителями. Для анализа требуется от 1 до 15 г растительного материала, ЭМ собирается в 1 мл растворителя.
Другим методом выделения и концентрирования терпеноидов является улавливание летучих веществ сорбентами (тенакс, полисорб). Этот метод удобен в тех случаях, когда необходимо исследовать легколетучие вещества в газовых образцах. Определенный объем газа, содержащего летучие вещества, пропускают через трубку с сорбентом или капилляр, охлажденный жидким азотом.
Быстрым методом выделения является испарение ЭМ из очень малых количеств растительного материала (3 - 5 мг), помещенных непосредственно в модифицированный испаритель газового хроматографа.
.3.3 Идентификация терпеноидов
Для идентификации терпеноидов используются различные методы хроматографии для разделения смесей терпеновых соединений. Широко применяются спектроскопические методы (УФ -, ИК -, ЯМР - спектроскопии, рентгеноструктурный метод) [65,37].
1) Физико-химические методы анализа.
Если цель исследования состоит в определении одного или нескольких компонентов в сложной смеси терпеноидов, то могут применяться различные относительно селективные физико - химические методы. Так, для определения отдельных компонентов ЭМ описано применение колориметрии окрашенных производных терпеноидов, спектрофотометрии в ИК - и УФ - областях спектра. Кислородсодержащие терпеноиды (спирты, альдегиды, кетоны) определяли с помощью неводной оксидиметрии и полярографии. Определение главных компонентов в ЭИ проводилось также методами ПМР - и13С - ЯМР - спектроскопии.
2) Хроматографические методы
а) ТСХ (тонкослойная хроматограмма) и БХ (бумажная хроматограмма)
Большую роль в исследовании смесей терпеновых соединений сыграла хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента. Эти сравнительно доступные методы позволяют проводить качественное и полуколичественное определение основных компонентов ЭМ. Для разделения ЭМ применяются системы растворителей различной полярности. Детектирование проводят облучением хроматограмм в УФ - светом или с помошью реагентов - проявителей (к. Н2SO4 , иногда с добавлением ванилина или анисового альдегида, SbCI3 или фосфорномолибденовой кислоты и др.), образующих окрашенные соединения с определяемыми веществами. Недостатками ТСХ и БХ является относительно большая длительность анализа, сравнительно малая эффективность разделения, невозможность точного количественного определения компонентов смеси.
б) ВЭЖХ (высоко эффективная жидкостная хроматограмма )
ВЭЖХ с успехом используется для анализа смесей терпеновых соединений. Важным преимуществом ВЭЖХ является возможность анализа малолетучих и термолабильных соединений .
Полупрепаративная ВЭЖХ позволяет разделить сложные смеси терпеноидов на фракции, что значительно упрощает их последующее исследование с помощью ГЖХ.
в) ГЖХ (газо-жидкостная хроматограмма)
ГЖХ наиболее широко используется для сложных смесей терпеновых соединений. Это обусловлено следующим: терпеноиды имеют температуру кипения от 150 до 350 0С и достаточное парциальное давление для проведения анализа этим методом. ГЖХ в настоящее время является наиболее эффективным методом разделения сложных смесей, она может использоваться в сочетании со спектроскопическими методами идентификации. Для анализа смесей терпеноидов успешно используют различные неподвижные фазы (НЖФ) широкого диапазона полярности - от неполярных (SE - 30, OV - 101) до полярных (карбовакс 20М).