Применение ПЦР в ветеринарии

Особое место полимеразная цепная реакция заняла при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. При массовых исследованиях поголовья на туберкулез применяется аллергическая диагностическая проба. Она основана на внутрикожном введении туберкулина (белковый субстрат, полученный при аутолизе микобактерий) и оценке возникающих реакций.

Внедрение ПЦР в схему диагностики туберкулеза крупного рогатого скота связано с тем, что ежегодно большое количество животных подвергаются вынужденному диагностическому убою. Фактически, по показаниям аллергической пробы, проходит убой здоровых животных. Как правило, на туберкулин реагируют высокопродуктивные животные и ущерб от вынужденного убоя достаточно высок. Аллергическая проба основана на реакции иммунных клеток на взаимодействие возбудителя или продуктов его распада. В организм животного вводится лиофилизированный белок (антиген) возбудителя, чтобы вызывать ответную реакцию организма на его введение, проявляющуюся клинически через некоторое время. Введение туберкулина вызывает возникновение кратковременной микобактеремии, обусловленной резким повышением сосудистой проницаемости вследствие выброса биологически активных веществ и активации имеющегося очага воспаления с образованием в нем микронекрозов (Корнева, 2002).

Сенсибилизированный организм животного представляет собой неустойчивый в реактивном отношении биологический комплекс, который легко может проявить повышенную чувствительность не только к тому веществу, который был сенсибилизирован, но и ко многим другим аллергенам. Туберкулин не является токсином, поэтому свойства реакции в основном зависят от состояния макроорганизма. На показания туберкулиновой пробы влияют многие факторы: возраст, упитанность, масть, наличие инфекционных и инвазионных болезней, авитаминоз, беременность и др (Черноусова, 2001).

Задачей ПЦР при диагностике туберкулеза является дифференциация истинных реакций на туберкулин от псевдоаллергических. Именно поэтому, выявленные ПЦР-положительные животные подлежат немедленной изоляции и диагностическому убою. Согласно дополнению к приказу № 5 Департамента Ветеринарии зону производственных испытаний тестсистем ПЦР с целью контроля за эпизоотической обстановкой по некоторым хроническим болезням животных в 2000-2002 гг. (приказ № 13-5-18 от 20.06.2000).

Применение ПЦР для идентификации и дифференциации вируса Блутанга.

Для синтеза кДНК используются наружные праймеры, фланкирующие продукт ПЦР размером 826 пар оснований. Амплификация с гнездовыми (внутренними) праймерами на нем дает продукт ПЦР размером 517 пар оснований, специфичный только для вируса блутанга (Корнева, 2002).

Проведенная ПЦР специфично обнаружила все серотипы вируса блутанга в исследуемых культуральных и мозговых образцах, что подтверждает, что участок генома кодирующий NS1 имеет консервативные последовательности.

Таким образом, полимеразная цепная реакция, в силу своей чувствительности и специфичности, является ценным методом для идентификации вируса блутанга в лизатах инфицированных клеток и пробах головного мозга мышей.

ПЦР- диагностика Лейкоза крупного рогатого скота .

Метод ПЦР-диагностики позволяет обнаружить наличие вируса в крови животных на более ранних стадиях инфекционного процесса, чем серологические тесты. Разработанный метод ПЦР-диагностики ВЛКРС-инфекции отличается высокой чувствительностью (для обнаружения ДНК-провируса достаточно 10 инфицированных клеток) относительно РИД. Использование метода ПЦР-диагностики в практике ветеринарии позволило бы выявлять ВЛКРС-инфекцию на самых ранних стадиях ее развития, что особенно важно при проведении оздоровительной работы в племенных хозяйствах, исследовании быков-производителей, а также на заключительных этапах оздоровления хозяйства

Выводы

. С момента изобретения ПЦР в 1983 году, метод ПЦР приобрёл большую популярность и способствовал развитию диагностических технологий.