Скрининг сырья T. patula на возможное присутствие основных классов биологически активных веществ

Скрининг проводили в извлечениях из цветков T. patula, полученных по следующей схеме:

Определение каротиноидов

- К 1 мл хлороформного извлечения аккуратно добавляли 10% раствор треххлористой сурьмы. Наблюдали появление синего окрашивания.

- К 1 мл хлороформного извлечения, по стенке пробирки, осторожно, добавляли концентрированную серную кислоту. Наблюдали появление темно-синего окрашивания.

Определение антраценпроизводных

Водное извлечение разливали в 2 пробирки по 2 мл. В одну пробирку добавляли 1 мл 10 % раствора едкой щелочи. Вторая пробирка являлась контрольной. Вишнево-красное окрашивание, указывающее на наличие антраценпроизводных, отсутствовало.

Определение дубильных веществ

В две пробирки помещали по 2 мл водного извлечения. В одну пробирку добавляли несколько капель железоаммонийных квасцов. Вторая пробирка являлась контрольной. Черно-зеленое окрашивание, указывающее на наличие дубильных веществ, отсутствовало.

Определение оксикоричных кислот

Наличие фенолкарбоновых кислот определяли с помощью ТСХ и БХ в системе растворителей: 15% уксусная кислота и н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:1). Хроматограммы рассматривали в УФ-свете с последующей обработкой реактивами: свежеприготовленными диазосоединениями в растворе Na2CO3; 2% раствором FeCl3 и 0,5н спиртовым раствором NaOH. Наличие пятен, характерных для оксикоричных кислот не наблюдали, что указывает на их отсутствие в сырье.

Определение азотистых оснований

К 3 мл извлечения прибавляли 3 капли (0,1 мл) 50 % раствора серной кислоты до рН 1,0 - 2,0 и фильтровали на часовое стекло. При прибавлении к фильтрату 3 капель (0,1 мл) 1 % раствора кремневольфрамовой кислоты появление мути, а затем осадка, не наблюдали, что указывает на отсутствие азотистых оснований.

Определение кумаринов

5,0 г цветков T. patula заливали 20 мл спирта этилового 95 % и нагревали на водяной бане до кипения, после чего оставляли настаиваться. Спиртовое извлечение отфильтровывали, упаривали на водяной бане до 5 мл. С полученным экстрактом проводили реакцию, позволяющую быстро провести предварительное обнаружение кумаринов. Для этого извлечение поместили в 2 пробирки по 2,5 мл. В одну прибавляли 5 мл 10 % раствора едкого натра и нагревали на водяной бане. После охлаждения в каждую пробирку добавляли по 4 мл дистиллированной воды. Появление желтой окраски в первой пробирки свидетельствует о наличие кумаринов.

Определение стеринов

Наличие стеринов можно доказать реакцией Либермана-Бурхарда (качественная реакция на стероидное ядро). 1 мл извлечения выпаривали досуха в выпарительной чашке, добавляли 2 мл этилового спирта, затем 2-3 капли уксусного ангидрида, перемешивали. Наслаивали аккуратно по стенке чашечки концентрированную серную кислоту. Наблюдали переход окраски от зеленой до фиолетовой, что свидетельствует о наличие стеринов.

Определение витаминов (аскорбиновой кислоты)

0,5 г измельченных цветков T. patula заливали 5 мл дистиллированной воды, перемешивали, оставляли на 15 мин и фильтровали. К 1 мл полученного извлечения прибавляли по каплям 0,04 % раствора 2,6 - дихлорфенолиндофенолята натрия в воде. Образование белого осадка не наблюдалось, что свидетельствует об отсутствие аскорбиновой кислоты.

Определение белка и аминокислот

а) биуретова проба на пептидную связь. В пробирку помещали 0,5 мл извлечения, прибавляли несколько капель биуретового реактива, слегка взбалтывали. Окрашивание, свидетельствующего о наличие белка не наблюдали.

б) нингидриновая реакция на a-аминокислоты. В пробирку вносили 0,5 мл извлечения прибавляли несколько капель 3 % спиртового раствора нингидрина, нагревали до кипения. Окрашивания, свидетельствующего о наличие a-аминокислот и белка не наблюдали.

Определение флавоноидов

Со спиртовым извлечением из цветков T. patula проводили следующие качественные реакции на флавоноиды:

а) Цианидиновая реакция. 3 мл извлечения упаривали досуха на водяной бане, остаток растворяли в 96 % этаноле. Полученное извлечение добавляли в сухую пробирку с 0,5 г металлического магния, приливали 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты. Через 5 минут наблюдали появление красного окрашивания, что свидетельствует о наличие флавоноидов.

б) К 1 мл извлечения добавляли 1-2 капли раствора хлористого железа. Наблюдали появление сине-зеленого окрашивания, что указывало на наличие фенольных соединений.